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    首頁   >    技術(shù)文章   >   蛋白質(zhì)沉淀法

    蛋白質(zhì)沉淀法

    點擊次數(shù):1234  更新時間:2016-02-17

     其他沉淀法

    一.等電點沉淀法

        兩性電解質(zhì)分子上的凈電荷為零時溶解度zui低,不同的兩性電解質(zhì)具有不同的等電點,以此為基礎(chǔ)可進行分離。如工業(yè)上胰島素時,在粗提液中先調(diào)PH8.0去除堿性蛋白質(zhì),再調(diào)PH3.0去除酸性蛋白質(zhì)。ELISA試劑盒

        利用等電點除雜蛋白時必須了解制備物對酸堿的穩(wěn)定性,不然盲目使用十分危險。 不少蛋白質(zhì)與金屬離子結(jié)合后,等電點會發(fā)生偏移,故溶液中含有金屬離子時,必須注意調(diào)整PH值。 等電點法常與鹽析法、有機溶劑沉淀法或其他沉淀方法聯(lián)合使用,以提高其沉淀能力。

    二.生成鹽復(fù)合物沉淀法

    1.金屬復(fù)合鹽法 

        許多有機物質(zhì)包括蛋白在內(nèi),在堿性溶液中帶負電荷,能與金屬離子形成沉淀。根據(jù)有機物與它們之間的作用機制,可分為羧酸、胺及雜環(huán)等含氮化合物類,如銅鋅鎘;親羧酸疏含氮化合物類,如概鎂鉛;親硫氫基化合物類,如汞銀鉛。蛋白質(zhì)-金屬離子復(fù)合物的重要性質(zhì)是它們的溶解度對溶液的介電常數(shù)非常敏感,調(diào)整水溶液的介電常數(shù)(如加入有機溶劑),即可沉淀多種蛋白。

    2. 有機鹽法

        含氮有機酸如苦味酸、苦酮酸、鞣酸等能與有機分子的堿性功能團形成復(fù)合物而沉淀析出。但此法常發(fā)生不可逆的沉淀反應(yīng),故用于制備蛋白質(zhì)時,需采用較溫和的條件,有時還需加入一定的穩(wěn)定劑。ELISA試劑盒

    3.無機復(fù)合鹽法

        如磷鎢酸鹽、磷鉬酸鹽等。

        以上鹽類復(fù)合物都具有很低的溶解度,極易沉淀析出。若沉淀為金屬復(fù)合鹽,可通以H2S使金屬變成硫化物而除去,若為有機酸鹽或磷鎢酸鹽,把有機酸和磷鎢酸等移入醚中除去,或用離子交換法除去。值得注意的是此類方法常使蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆沉淀,應(yīng)用時必須謹慎。

    三. 選擇性變性沉淀 

        其原理是利用蛋白質(zhì)、酶和核酸等生物大分子對某些物理或化學(xué)因素敏感性不同,有選擇地使之變性沉淀,以達到分離提純的目的。

        此方法可分為:1)利用表面活性劑或有機溶劑引起變性;2)利用對熱的不穩(wěn)定性,加熱破壞某些組分,而保存另一些組分;3)酸堿變性。

    四.非離子多聚物沉淀法

        非離子多聚物是六十年代發(fā)展起來的一類重要沉淀劑,zui早用于提純免疫球蛋白、沉淀一些細菌和病毒,近年來逐漸廣泛應(yīng)用于核酸和酶的分離提純。這類非離子多聚物包括不同分子量的聚乙二醇、EO、葡聚糖、右旋糖酐硫酸鈉等,其中應(yīng)用zui多的是聚乙二醇。ELISA試劑盒

        用非離子多聚物沉淀生物大分子和微粒,一般有兩種方法:1)選用兩種水溶性非離子多聚物組成液液兩相體系,不等量分配,而造成分離。此方法基于不同生物分子表面結(jié)構(gòu)不同,有不同分配系數(shù)。并外加離子強度、PH值和溫度等影響,從而擴大分離效果。2)選用一種水溶性非離子多聚物,使生物大分子在同一液相中,由于被排斥相互凝聚而沉淀析出。該方法操作時先離心除去大懸浮顆粒,調(diào)整溶液PH值和溫度至適度,然后加入中性鹽和多聚物至一定濃度,冷貯一段時間,即形成沉淀。

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